La cytométrie de flux est une technique puissante utilisée en biologie et en médecine pour analyser et trier les cellules en suspension.
Deux approches principales sont couramment utilisées : la cytométrie classique et la cytométrie spectrale. Bien qu’elles partagent des similitudes dans leur fonctionnement de base, elles diffèrent dans leurs capacités d’analyse et leurs applications spécifiques.
La version classique
La cytométrie classique, également connue sous le nom de cytométrie de flux conventionnelle, repose sur la détection de la lumière dispersée et émise par des cellules marquées avec des fluorochromes spécifiques.
Les cellules sont entraînées dans un flux continu de liquide tampon et passent devant un faisceau laser. Les fluorochromes présents sur les cellules réagissent à l’excitation du laser en émettant de la lumière fluorescente à des longueurs d’onde spécifiques.
Ces signaux fluorescents sont détectés par des photomultiplicateurs et convertis en données numériques pour l’analyse.
La version spectrale
En revanche, la cytométrie spectrale étend les capacités de la cytométrie classique en permettant la détection et l’analyse de la lumière fluorescente sur une gamme plus large de longueurs d’onde.
Au lieu d’utiliser des filtres optiques pour séparer les signaux fluorescents, la cytométrie spectrale utilise un système de dispersion spectrale qui divise la lumière émise en ses différentes longueurs d’onde constitutives.
Cela permet une séparation plus précise des signaux fluorescents superposés et offre une meilleure résolution des populations cellulaires avec des étiquetages multiples ou complexes.
Comparer avant de choisir
Les différences entre la cytométrie classique et la cytométrie spectrale résident principalement dans leur capacité à discriminer les signaux fluorescents et à analyser des populations cellulaires complexes.
La cytométrie spectrale offre une résolution spectrale plus élevée, permettant une analyse plus précise des populations cellulaires hétérogènes et des échantillons présentant une forte superposition de signaux fluorescents.
Cependant, elle nécessite généralement des équipements plus sophistiqués et des compétences analytiques plus avancées.
En résumé
La cytométrie classique est une méthode éprouvée et largement utilisée pour l’analyse de base des cellules en suspension, tandis que la cytométrie spectrale représente une avancée technologique offrant une résolution spectrale améliorée pour l’analyse de populations cellulaires plus complexes et hétérogènes.
Le choix entre les deux dépendra des besoins spécifiques de l’expérience ou de l’application.
Des questions?
Rédaction : Philippe St-Onge, comité de L’écho des plateformes
Tout ce que vous avez toujours voulu savoir sur… la cytométrie de flux
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