Immunomonitoring clinique

Traitement et isolement standardisés des lymphocytes du sang périphérique, du sérum ou du plasma provenant de tubes ou de poches, de donneurs sains ou de patients recrutés dans des études cliniques. Les cellules mononuclées (PBMCs) isolées peuvent être utilisées fraîches pour des études fonctionnelles ou congelées pour des analyses ultérieures. Les cellules isolées sont conservées dans la phase vapeur de réservoirs d'azote liquide. Les échantillons de sérum ou de plasma sont conservés dans des congélateurs à très basse température (-80 °C).

L’analyse cytométrique en flux multicouleur (jusqu’à 27 couleurs) permet d’évaluer le phénotype immunologique et l’état d’activation des différentes populations cellulaires en périphérie ou dans les tissus. Les données peuvent ensuite être corrélées à des réponses cliniques.

Le marquage de cytokines intracellulaires permet d’évaluer la présence de cellules T sensibles à un antigène d’intérêt en quantifiant les cellules productrices de cytokines avant et après l’exposition à l’antigène. Des marqueurs phénotypiques et d’activation immunitaire peuvent également être utilisés pour évaluer les réponses immunitaires.

Les trousses d'immuno-essais Meso Scale Discovery, disponibles commercialement, peuvent être utilisées pour la détection de plusieurs cytokines par électro chimiluminescence. Les analyses peuvent être réalisées sur divers substrats biologiques tels que du plasma, du sérum, un surnageant cellulaire, un broyat de tissus ou du liquide céphalorachidien. Les trousses se composent de plaques recouvertes de dix anticorps différents, spécifiques de cytokines individuelles ou d'autres analytes protéiques. La technologie permet la détection simultanée de plusieurs biomarqueurs à partir d'un seul échantillon de faible volume.

L’ELISPOT permet de quantifier la proportion de cellules T réactives à un antigène particulier. La quantification repose sur la sécrétion d'IFN-γ par les cellules qui rencontrent leur antigène. La méthode ELISPOT est hautement sensible, reproductible et simple. Elle demeure la technologie de référence pour mesurer des réponses spécifiques de lymphocytes T dans plusieurs domaines de recherche (développement de vaccins, maladies infectieuses, allergies, tumeurs et maladies auto-immunes).

L’immunofluorescence permet le marquage spécifique de protéines (jusqu’à cinq couleurs) directement dans la cellule. L’immunofluorescence permet non seulement d’observer la présence d’une protéine, mais aussi sa localisation dans la cellule ou le tissu analysé.

Le système Rhapsody de BD Biosciences combine de manière unique l'analyse de l'expression des gènes et celle des protéines de surface à l’échelle cellulaire. La plateforme peut offrir les services suivants grâce au système Rhapsody :

• Séquençage d’ARN 3’ à partir de cellules uniques (ScRNASeq) pour la transcriptomique ciblée ou non ciblée (whole transcriptomics)
• Séquençage VDJ pour l’analyse multiomique de récepteurs de cellules T et de cellules B (TCR/BCR multiomic assay)
• Caractérisation simultanée des protéines de surface et de l'expression de l'ARNm à partir de cellules uniques (AbSeq)